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作者：聯科生物 發布日期：2015-07-30 09:00
堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase）在堿性環境中可催化水解磷酸酯。堿性磷酸酶的表達水平和活性變化與肝臟和骨骼的很多病理狀態有關。聯科生物的堿性磷酸酶活性檢測試劑盒以4-硝基苯磷酸鹽為底物，可方便、快捷、靈敏地檢測哺乳動物的血清及其它生物樣品中的堿性磷酸酶活性。一、試劑盒組分 二、使用方法1.試劑準備：取出所有試劑(包括檢測樣品)，恢復至室溫。 標準品工作液：取15 μl p-nitrophenol溶液(10 mM)，用檢測緩沖液稀釋至0.3 ml，最終濃度為0.5 mM。 2.檢測方案參考如下。標準品的用量分別為2、4、8、16、24、32和40 μl，推薦設兩個重復。樣品通常加50 μl，如樣品中的堿性磷酸酶活性過高，可減少樣品用量或適當稀釋后。為消除有色樣本本身顏色的影響，需設立樣品對照孔，即加入樣本，以檢測緩沖液代替顯色底物的對照。
3.加完所有樣品后，在微孔板震蕩器上震蕩混勻數十秒。37℃避光孵育5 - 10分鐘。若待測樣品中堿性磷酸酶活性較低，可適當延長孵育時間至30分鐘。 4.每孔加入100 μl終止液終止反應。 5.在405 nm或400 - 415 nm范圍內檢測吸光度。如不能立即測定，可在數小時內完成測定，所顯現的黃色在數小時內穩定。 6.結果計算：將標準品孔的OD值減去空白對照孔的OD值，校準后的標準品孔OD值與對應的p-nitrophenol濃度建立標準曲線。樣品孔的OD值減去樣品對照孔的OD值，校準后的樣品OD值代入標準曲線，計算p-nitrophenol濃度。 堿性磷酸酶活性(U/ml) = A/V/T。其中A為樣品中產生的p-nitrophenol量(μmol)；V為樣品體積(ml)；T為反應時間(min)。 7.堿性磷酸酶活性單位的定義：在pH9.8的DEA緩沖液中，37℃條件下，每分鐘水解pNPP顯色底物產生1 μmol p-nitrophenol所需的堿性磷酸酶的量定義為一個酶活力單位，也被稱作一個DEA酶活力單位。 在pH9.6的甘氨酸緩沖液中，25℃條件下，每分鐘水解pNPP顯色底物產生1 μmol p-nitrophenol所需 的堿性磷酸酶的量定義為一個酶活力單位，也被稱作一個Glycine酶活力單位。一個Glycine酶活力單位約相當于3個DEA酶活力單位。本試劑盒測定的是DEA酶活力單位。 2.所有樣品避免反復凍融，建議分裝后凍存。 3.血清樣品通常需10倍稀釋，其它樣品可做梯度稀釋，使OD值落于標準曲線檢測范圍內?？捎迷呀庖?或PBS或本試劑盒提供的檢測緩沖液進行稀釋。 4.為了您的安全和健康，請穿戴實驗防護服、手套、口罩等必要的防護裝備。 5.更多產品敬請關注聯科生物網站或來電咨詢。 |
