01. ELISA通關必備丨基礎知識
ELISA Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay 酶聯免疫吸附檢測，利用抗原抗體的特異性反應，對樣本中可溶性目的產物進行定量檢測。 ELISA 與常規免疫實驗對比 ELISA樣本制備簡單；靈敏度高（pg/ml）；特異性強；重復性好；操作簡單；檢測儀器易獲得。 Western Blot IHC/IF ELISA 定性 定性 定性 半定量 半定量 定量 半定位 定位 非…
2022-06-27
02. ELISA通關必備丨試劑盒構成及檢測原理
ELISA簡要操作步驟及原理 以雙抗體夾心法為例，ELISA簡要操作步驟如下： 包被抗體包被到酶標板 加樣本/標準品 加生物素標記的檢測抗體 加HRP標記的鏈霉親和素 加顯色底物TMB 加終止液 ELISA 試劑盒組分 酶標板（Microplate） 酶標板，在ELISA（酶聯免疫吸附測定）中作為載體的酶標板對抗原抗體或抗原抗體復合物的吸附起著重要作用。 標準品（Standard） 標準品即為已知…
2020-06-28
03. ELISA通關必備丨如何選擇試劑盒
選擇ELISA試劑盒有哪些關鍵要素？實驗物種、樣本類型、檢測物水平、樣本可獲得性以及供應商資質。本文介紹八大質控指標，以確保檢測的準確性和可靠性。此外，還詳細說明了ELISA試劑盒的主要組分及其功能，幫助大家在五分鐘內掌握如何選擇適合自身實驗需求的試劑盒。
2022-06-29
05. ELISA通關必備丨樣本篇丨常見樣本丨細胞
利用ELISA（酶聯免疫吸附測定）進行檢測的樣本類型包括常見的血液（血清、血漿），組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水等，這些樣本收集的時間、處理方法和保存都會影響到ELISA實驗的結果。下面對常見細胞樣本處理方法整理，希望對您有所幫助。 細胞樣本根據目的物所在部位可選擇細胞裂解液或細胞培養上清作為樣本。 需要注意的是： 因該類樣本干…
2022-08-16
06. ELISA通關必備丨樣本篇丨常見樣本丨組織
利用ELISA（酶聯免疫吸附測定）進行檢測的樣本類型包括常見的血液（血清、血漿），組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水等，這些樣本收集的時間、處理方法和保存都會影響到ELISA實驗的結果。下面對常見組織樣本處理方法整理，希望對您有所幫助。 ■? 組織樣本一般是制成組織勻漿，處理方法如下： 取適量組織塊，于預冷PBS（02mol/L, …
2022-08-29
07. ELISA通關必備丨樣本篇丨不常見樣本
介紹使用ELISA技術檢測時處理幾種不常見樣本的方法，包括唾液、痰液、尿液、肺泡灌洗液、腦脊液以及胸水。對于每種樣本，文章詳細介紹采集前的準備、采集過程、離心條件及儲存要求等關鍵步驟，為大家提供實用指導以保證實驗結果的準確性。正確的樣本處理方法對提高ELISA檢測效果至關重要。
2022-09-14
08. ELISA通關必備丨操作篇丨溶解與稀釋標準品
ELISA標準曲線是結果計算的尺子，標準品是ELISA 實驗成功與否的關鍵點。怎樣正確溶解、稀釋標準品呢？ 粉末標準品短暫離心，讓因運輸沾到管蓋、管壁的標準品沉到管底。 根據瓶標簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解 10-30min，讓粉末完全溶解。注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋白未溶解，槍頭帶出部分蛋白，待完全溶解后可吹吸或渦旋振蕩混勻。 標準品梯度稀釋： 標準品稀釋液…
2022-10-10
09. ELISA通關必備丨操作篇丨加樣與洗板
ELISA 加樣操作要點 精準的儀器和準確的操作是保證ELISA結果準確關鍵，怎樣的加樣方式才是正確呢？ELISA實驗中一般有5次加樣，即加標本、加檢測抗體、加酶結合物和加顯色底物及終止液。小科將ELISA加樣操作要點進行歸納，供參考。 實驗室使用的微量加樣器應注意保養并定期校正。ELISA比較敏感，每孔加入液體量誤差會導致最后讀數差別，因此避免儀器帶來誤差。 加樣前，溶液充分混勻，垂直懸空加入液…
2022-11-02
10. ELISA通關必備丨操作篇丨常見問題及解決方案
一、為什么所有試劑和檢測樣本要平衡至室溫后再進行加樣操作？ 溫度是ELISA結合反應的重要影響因素。為了使所有樣本在一致的溫度下反應，實驗前務必將所有試劑平衡至室溫，包括檢測樣本。避免因溫度的動力學反應差異而導致ELISA檢測結果的不準確。 二、如何獲得良好線性的標準曲線？ 按照推薦方式保存標準品；溶解標準品之前需短暫離心，徹底收集粉末；確保標準品完全溶解和混勻（大約10min），然后再進行后續的…
2022-12-06
11. ELISA通關必備丨結果篇丨白板與花板
一、白板 如果顯色完成后，肉眼可見整板沒有顯示反應，可能原因及應對方法是什么呢？小科整理了可能的原因，希望對您有幫助。 序號可能原因解決方案 1試劑盒儲存不當；不同試劑盒試劑混用購買新的試劑盒，注意儲存條件；不可混用 2孵育溫度低，時間短如果溫度偏低，則延長孵育時間和顯色時間 3錯加、漏加試劑嚴格按照說明書步驟添加正確試劑 4用于配置溶液的容器不干凈，或水有問題使用干凈容器以及合格的蒸餾水 5檢測…
2022-12-19
12. ELISA通關必備丨數據篇丨數據分析與標曲擬合
做完ELISA實驗，測完吸光度，數據怎么處理？標準曲線不是直線怎么辦？小科整理了ELISA數據處理相關知識，希望對您有幫助。 一、ELISA 標準曲線分析步驟 標曲和樣本孔的每個孔 450nm 的OD值減去630nm（或570nm）的OD值； 再將獲得的標曲和樣本孔數據分別減去空白孔Blank的OD值； 以標曲的濃度為橫坐標，以上算出的OD值為縱坐標，擬合標曲（選擇R2值大于0.99的比較好的擬合…
2023-01-09
13. ELISA通關必備丨數據篇丨標準曲線不佳
ELISA實驗加入顯色底物后，標準品有顏色，但結果分析發現標準品最高點吸光值偏低或偏高、標準曲線無梯度等等，總結如下原因： 一、標準曲線最高點吸光值偏高，超出儀器檢測范圍 ELISA標準曲線最高點的吸光值一般在3.0以下，若太高超出儀器檢測范圍，顯示OVER FLOW，可能原因： 序號 可能原因 解決方法 1 如OD絕對值靠譜，則顯色過度 TMB顯色體系中建議根據S1，S2顏色進行判斷， 當S1，…
2023-01-17
14. ELISA系列 丨Selectin家族
選擇素（Selectin，CD62）是一類糖蛋白，在流體動力作用下負責細胞間的異質性相互作用。選擇素之所以得名，是因為它們能夠通過N末端的胞外C型凝集素結構域結合碳水化合物。 Selectin家族成員 選擇素家族由三個成員組成，以其最初被鑒定的細胞類型命名：E-選擇素（內皮細胞）、P-選擇素（血小板）和L-選擇素（淋巴細胞）。他們的CD命名分別是：CD62E、CD62P、CD62L。…
2023-05-08
