流式系列二 | 周期檢測方法及常見問題一網打盡

01細胞周期檢測方法（兩種）

1、一步法活細胞檢測

1.1樣品制備，收集2×10⁵-1×10⁶個活細胞，離心棄上清，用PBS洗滌一次，離心棄上清

1.2復染，加入1 m L DNA staining solution（Cat#CCS01），渦旋振蕩5 - 10秒混勻。室溫避光孵育30分鐘，進行流式檢測。

2、活細胞/固定細胞檢測

2.1可當天檢測的活細胞樣本

2.1.1收集2×10⁵-1×10⁶個細胞，離心棄上清。用PBS洗滌一次，離心棄上清

2.1.2加入1 m L DNA Staining solution 和10 μ L Permeabilization solution（Cat#CCS012），渦旋振蕩5-10秒混勻。室溫避光孵育30分鐘

2.1.3選擇最低上樣速度，在流式細胞儀上進行檢測。

2.2當天無法檢測的活細胞樣本

2.2.1按照下述方法固定，或其他合適的方法固定

a.收集2×10⁵-1×10⁶個細胞，離心棄上清。輕彈管壁，使沉淀重懸在殘余的液體中，加入1 m L 室溫下的PBS

b.將細胞緩慢加入至3 m L 無水乙醇(-20℃預冷)中，邊加邊高速攪拌。-20℃固定過夜，可保存數月

2.2.2檢測當天，將固定細胞離心，棄去乙醇，輕彈管壁使沉淀松散，加入2-5 m L 室溫下的PBS，放置15分鐘使細胞再次水化。離心，棄上清

2.2.3加入1 m L DNA staining solution，渦旋振蕩5-10秒混勻，室溫避光孵育30分鐘

2.2.4選擇最低上樣速度，在流式細胞儀上進行檢測。

02實驗結果展示

03實驗注意事項

1、制備單細胞懸液：操作應輕柔，減少碎片。

2、最低速度上機檢測：降低CV，避免儀器把相鄰細胞當做一個細胞。

3、排除粘連體：避免細胞粘黏檢測的DNA含量為非2倍體，導致實驗結果不準確。

4、PI的坐標選線性：線性更能體現DNA含量的倍數關系。

5、實驗放最后做：由于PI具有黏性，通常周期實驗放在最后做，否則需要深度清洗后，再進行其他實驗。

6、固定細胞后，雖然可以保持較長時間再上機，但是為了保證最佳的實驗效果，建議在一個小時之內上機，避免時間過長細胞黏連較多，影響實驗結果的準確性。04實驗常見問題及解決方案

看完之后是不是對周期實驗有了進一步了解，大家還有其它實驗問題也可以跟小科交流哈，歡迎大家在公眾號留言。

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